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液相色譜儀全面使用要求與規范?
作者：依利特 來源：液相售后 2025-10-13 11:03:07
不管是實驗室新手還是常年和儀器打交道的老手，想要讓液相色譜儀始終保持穩定的工作狀態、測出準確可靠的數據，每一個操作細節都不能馬虎。下面這些使用要求和規范，都是從日常實操經驗里總結出來的，跟著做既能保護儀器，也能少走很多彎路。?
一、環境與基礎準備?
儀器就像人一樣，也需要舒服的 “工作環境”。得把它放在平穩、沒有振動的工作臺上，遠離暖氣、烘箱這些熱源，也別讓陽光直接曬著 —— 溫度忽高忽低、環境亂糟糟的，很容易影響檢測結果。一般來說，環境溫度控制在 15-30℃，濕度符合儀器說明書要求，平時多擦擦工作臺，保持周圍干凈，儀器才能 “心情好” 地干活。?
電源和接地更是不能大意。一定要用穩定的電源，要是電壓總波動，不僅數據會飄，還可能傷儀器。另外，良好的接地必不可少，這不僅是為了防止操作時觸電，還能避免電磁干擾導致的數據不穩定，畢竟安全和準確都是第一位的。?
表1.環境與基礎準備要求?
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二、流動相（溶劑）準備?
流動相是液相色譜儀的 “血液”，質量過關才能讓檢測順暢。溶劑和試劑必須用 HPLC 級或者更高級別的，別為了省點成本用低級別的，后數據不準反而白忙活。?
水相得用新鮮制備的超純水，電阻值要達到 18.2 MΩ?cm 才行 —— 放久了的純水容易滋生細菌、混入雜質，會堵塞管路和色譜柱。?
所有流動相用之前，都得用 0.22μm 或者 0.45μm 的微孔濾膜過濾一遍，把里面的顆粒雜質濾掉，不然這些小顆粒會像 “沙子” 一樣，磨損泵頭、堵色譜柱，后續修起來既費錢又費時間。?
過濾后的流動相還得脫氣，常用的超聲波脫氣或者在線脫氣機都可以。脫氣后別著急用，等它恢復到室溫再用，不然溫度差異會讓流動相里又產生小氣泡，影響輸液穩定性。?
關于緩沖鹽，有兩個點一定要記牢：一是盡量別用容易在有機相里析出的鹽（比如磷酸鹽），而且有機相的比例也不能太高，不然鹽析出來會堵管路；二是緩沖鹽溶液好現配現用，別想著一次配很多存起來，放久了容易長菌，到時候不僅污染系統，還會影響檢測結果。至于怎么保護泵和色譜柱，后面的清洗規程里會詳細說。?
表2.流動相（溶劑）準備規范
三、泵與輸液系統?
給泵選流動相，首先要考慮溶劑相容性。千萬別用純乙腈這類純有機相當流動相，很容易讓單向閥粘住，導致泵吸不上液，到時候儀器 “罷工”，還得拆泵維修。一般建議水相比例不低于 5%，這樣能減少單向閥出問題的概率。?
氣泡是泵和輸液系統的 “大敵”，必須提前預防、及時排除。輸液前一定要把流動相充分脫氣，要是發現管路里有氣泡，趕緊用注射器抽吸把氣泡趕出去；如果泵壓力不穩、流速也不穩定，大概率是泵里進了氣泡，這時候執行灌注 /purge 操作就能解決。?
更換流動相時，要是兩種流動相不互溶（比如從正己烷換到甲醇），可不能直接換，必須用異丙醇這類中間溶劑過渡沖洗，不然鹽或者強極性物質會析出，堵在管路里。另外，每次實驗結束后，只要用了緩沖鹽，一定要馬上執行清洗程序，別等液體干了再洗，到時候鹽分結塊就難清理了。?
表3.泵與輸液系統操作要點
四、色譜柱使用與維護?
色譜柱是液相色譜儀的 “核心部件”，用的時候得嚴格按照說明書來。首先是 pH 耐受范圍，大部分色譜柱的 pH 范圍在 2-8，特殊色譜柱可能會寬一點，千萬不能往里面注射強酸、強堿樣品，尤其是 pH>8 的堿性樣品，很容易破壞色譜柱的固定相，縮短使用壽命。?
操作壓力也得注意，不能超過色譜柱和儀器的大耐受壓力。要是發現壓力突然異常升高，別繼續用了，這通常是堵塞的征兆，得趕緊排查原因，不然會把色譜柱壓壞。?
柱溫箱要保持恒定溫度，溫度穩定了，分析結果的重現性才好，不然每次測出來的數據都不一樣，根本沒法用。?
新色譜柱或者更換流動相后，得用新流動相充分平衡，一般需要 10-20 倍柱體積，直到基線平穩了才能開始檢測，不然數據會不準。?
如果色譜柱長期不用，一定要按照說明書的要求清洗和保存。反相柱通常保存在甲醇或乙腈里，正相柱保存在正己烷里，有一點要記住：絕對不能用純水保存色譜柱，純水會讓固定相水解，還容易長菌。?
另外，建議在分析柱前面加裝保護柱，尤其是處理復雜樣品的時候，保護柱能擋住大部分雜質，延長分析柱的壽命，畢竟一根分析柱可不便宜，能省則省。?
表4.色譜柱使用與維護標準
五、進樣系統?
進樣前的樣品準備很關鍵，樣品溶液必須澄清，得用 0.22μm 或者 0.45μm 的濾膜過濾，而且要注意濾膜材質和流動相的濾膜區分開，別混用。要是樣品里有雜質顆粒，會堵進樣針和色譜柱，到時候不僅要換配件，還得重新做實驗。?
溶解樣品的溶劑也有講究，盡量用流動相或者比流動相弱的溶劑，要是用了強溶劑，容易出現溶劑效應，導致峰形畸變，影響定量結果。?
每次做完樣品分析，一定要把進樣器清洗干凈，包括進樣針的內外壁，都要用溶解樣品的溶劑充分沖洗，不然樣品殘留會污染下一個樣品，導致數據交叉污染，之前的實驗可能就白做了。?
還有些樣品是絕對不能直接進樣的，比如蛋白質、血液、組織勻漿這類生物樣品，以及含有不溶性顆粒的樣品。這些樣品必須先做前處理，比如蛋白沉淀、萃取、離心、過濾，處理干凈后才能進樣，不然會對儀器造成嚴重損害。?
表5.常見故障排查指引
六、檢測器?
檢測器里的流通池，是保證數據準確的關鍵部件，一定要保持清潔。平時很多時候基線不穩、數據不準，都是因為流通池被污染了 —— 要么是緩沖鹽析出，要么是樣品殘留，所以每次用完后，一定要按照規程清洗流通池。?
對于紫外檢測器這類有燈源的檢測器，要注意延長燈的使用壽命。別沒事就開關燈，儀器不用的時候，按照規程關掉燈就行，頻繁開關會縮短燈的壽命，換一根燈也不便宜，能省則省。?
表6.進樣系統操作規范
七、系統清洗與關機?
用含緩沖鹽的流動相做完實驗后，清洗步驟絕對不能偷懶，一定要馬上執行以下程序：先用去離子水（或者 5-10% 的甲醇水）低速沖洗管路和色譜柱，至少沖 30-60 分鐘，把里面的鹽分徹底沖干凈；然后再用甲醇或乙腈高速沖洗 40 分鐘以上，把水相置換出來，同時洗掉系統里的有機殘留。要是不徹底清洗，鹽分在管路里結塊，下次開機就會堵，到時候清理起來更麻煩。?
整體關機的時候，先把系統流速降到零，然后關掉檢測器燈，接著關泵和軟件，后斷開電源。一步一步來，別著急，這樣能保護儀器的各個部件，延長整體使用壽命。?
八、故障預防與排查?
平時多注意預防，能少出很多故障。要是遇到壓力過高（大概率是堵塞了），可以按照這個順序檢查和清洗：先檢查保護柱，該換就換、該洗就洗；然后是混合器里的在線過濾器，拆下來清洗干凈；接著是管路過濾器，同樣檢查清洗；后是泵頭單向閥，要是堵了，用異丙醇沖洗，或者放超聲波里用異丙醇清洗，要是無機物堵塞，還能用 10% 的稀硝酸清洗。?
要是遇到壓力過低或者沒壓力，先看看流動相是不是用完了，管路接口有沒有漏液；要是都沒問題，可能是泵里進了大量氣泡，執行灌注程序就能解決。?
要是基線噪音大或者漂移，先檢查流動相是不是新鮮的、有沒有充分脫氣；然后看看檢測器燈的能量夠不夠，是不是快到壽命了；再檢查柱溫是不是穩定，有沒有忽高忽低；后看看流通池是不是被污染了，要是污染了趕緊清洗。?
其實只要跟著上面這些要求和規范操作，液相色譜儀就能一直保持佳工作狀態，測出來的數據可靠，儀器和色譜柱的壽命也能顯著延長，既省心又省錢。
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