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高效液相色譜儀進樣操作全攻略：手把手教你做對每一步，數據精準無誤

做高效液相色譜（HPLC）分析，結果忽高忽低、峰形難看、壓力不穩？問題大概率出在進樣這個核心環節。進樣操作看似簡單，卻是影響數據精度、儀器壽命的關鍵，一個細節疏漏就可能導致整批實驗數據作廢，甚至損傷昂貴的色譜柱。

今天為大家整理一份保姆級HPLC進樣操作流程、核心避坑要點及故障速查方案，手把手教你規范操作，避開常見失誤，確保每次進樣精準、可靠，數據零偏差！

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第一部分：標準操作流程——照做零失誤，步步有章法

第一步：上機前萬全準備，筑牢實驗基礎（重中之重）

1.樣品預處理：樣品需完全溶解無沉淀，必須用0.22 μm（反相柱）/0.45 μm（正相柱）HPLC專用濾膜真空過濾，杜絕顆粒雜質，這是保護色譜柱和流路的鐵律，缺一不可。

2.樣品瓶規范：使用潔凈的液相專用螺紋樣品瓶，樣品液位控制在瓶身1/2-2/3處（液位過低易吸空、過高易漏液污染），配套瓶蓋+進樣墊擰緊密封，一瓶一蓋一墊，嚴禁混用；放入樣品盤時核對位置，瓶簽朝外，避免錯樣、漏樣。

3. 儀器狀態核查：確認流動相足量、脫氣徹底、管路無氣泡，系統壓力穩定、基線平直（基線噪聲≤0.1mV，漂移≤0.5mV/h），柱溫箱達到設定溫度，儀器進入就緒狀態。

第二步：上機精準操作，細節把控精度

1. 方法參數設置：在工作站中準確錄入進樣體積、洗針次數/時間、洗針溶劑、柱溫、流速等參數；常規定量分析，進樣體積建議控制在定量環容量的50%以內（如20μL定量環，進樣≤10μL），大化保證進樣重復性。

2. 樣品序列建立：清晰錄入樣品編號、樣品盤位置、樣品名稱，數據文件命名遵循「日期-項目-樣品號」規范，便于后期溯源、數據整理，避免文件混亂。

3. 后隱患排查：檢查廢液瓶液位（≤80%），防止廢液倒吸污染流路；確認進樣器門關閉到位，無松動。

4. 啟動運行監測：點擊序列開始，觀察首次進樣時系統壓力的短暫波動、基線的正常抬升，這是樣品成功注入的直觀訊號；若壓力無變化、基線無響應，立即停止運行排查問題。

第三步：實驗后收尾維護，延長儀器壽命

1.進樣針保養：序列結束后，將進樣針置于90%水+10%甲醇混合清洗液中，執行自動洗針程序（洗針3-5次），避免針內殘留樣品結晶。

2. 流路專項清洗：若分析高鹽、高粘度、強極性樣品，需用純水（或低鹽緩沖液）沖洗進樣閥及流路10-15min，再用甲醇/乙腈沖洗，防止鹽結晶、殘留物堵塞管路和定量環。

3. 數據與耗材整理：及時備份實驗數據至專用硬盤，避免數據丟失；取出樣品盤內剩余樣品瓶，清洗晾干備用，清理進樣器周邊殘留溶劑。

第二部分：四大核心避坑要點——遠離雷區，數據+儀器雙保障

核心1：杜絕交叉污染——數據純凈度的生命線

1.禁忌：高濃度樣品后直接進低濃度樣品、瓶蓋/進樣墊混用、洗針不徹底

2.規范：① 高濃度樣品/標樣分析后，增加洗針次數（5-8次）+延長洗針時間，洗針溶劑選用「強洗脫能力溶劑」（如純甲醇、乙腈，或甲醇-水混合液）；② 瓶蓋內墊是交叉污染高發區，必須專蓋專用，污染后立即更換；③ 樣品瓶使用前用甲醇超聲清洗，晾干后再裝樣。

核心2：確保進樣精準——結果重復性的核心

1.禁忌：樣品液含氣泡、樣品溶劑與流動相洗脫能力差異過大、定量環過載

2.規范：① 樣品過濾后短暫離心（3000r/min，5min），或用手指輕彈瓶壁，讓微小氣泡浮起排出，氣泡是進樣精度的「隱形殺手」；② 規避溶劑效應：樣品溶解溶劑優先選用「流動相初始比例溶液」，若樣品溶解性差，可適當提高有機相比例（差值≤20%），防止峰形前延、分叉、拖尾；③ 嚴禁超定量環容量進樣，避免定量不準。

核心3：愛護核心部件——延長儀器/色譜柱使用壽命

1.禁忌：樣品未過濾直接進樣、忽視進樣閥密封墊損耗、長期不清洗定量環

2.規范：① 過濾是底線：未過濾的樣品顆粒是色譜柱堵塞、柱效下降的頭號元兇，哪怕樣品看似澄清，也必須過濾；② 關注進樣閥密封墊：屬于易耗品，2000-5000次進樣后及時更換，若出現壓力異常波動、進樣口滲漏，立即停機更換；③ 每月拆解清洗定量環1次，去除內部殘留雜質。

核心4：嚴守安全規范——保護自身+設備安全

1. 禁忌：系統帶壓操作進樣器、無防護處理有毒樣品、溶劑廢液隨意傾倒

2. 規范：① 所有進樣器拆卸、管路連接操作，必須先卸壓再進行，嚴禁帶壓擰動接頭、打開進樣器門，防止溶劑噴濺、部件損壞；② 處理有毒、腐蝕性、揮發性樣品時，在通風櫥內操作，佩戴丁腈手套、護目鏡、實驗服；③ 廢液分類收集，交由專業機構處理，嚴禁直接排放。

第三部分：常見問題速查表——秒判原因，快速解決，不求人

規范進樣，讓HPLC分析事半功倍

高效液相色譜分析，七分操作，三分儀器，而進樣操作正是整個實驗的「咽喉環節」。將標準化流程內化為操作習慣，把避坑要點牢記于心，不僅能獲得峰形對稱、數據精準、重復性優異的實驗圖譜，更能大幅減少儀器故障，延長色譜柱、進樣閥等核心部件的使用壽命，提升實驗效率。

細節決定成敗，從每一次規范進樣做起，讓你的HPLC分析工作告別數據異常、儀器故障，全程得心應手！

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