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新手必看！分析型液相色譜儀 6 大高頻故障排查與維護技巧?
作者：依利特 來源：液相售后 2025-10-31 15:41:25
分析型液相色譜儀作為生物醫學檢測、環境污染物分析、石油化工成分分離等領域的核心設備，憑借全觸摸式操作屏的便捷性和精準的分析能力，成為實驗室的工具。但在長期使用中，受流動相配置、樣品處理、設備損耗等因素影響，儀器易出現各類故障，不僅影響檢測效率，還可能導致數據偏差。本文針對分析型液相色譜儀6 大高頻故障，從原因分析到實操處理步驟逐一拆解，助力實驗室人員快速排查問題，保障儀器穩定運行，提升檢測結果可靠性。?
一、分析型液相色譜儀柱壓過高怎么辦？（高頻故障）?
柱壓過高是分析型液相色譜儀使用中常見的問題之一，若不及時處理，可能導致色譜柱損壞，影響分離效果。?
原因分析?
緩沖液鹽分析出沉積：實驗中常用的磷酸鹽、乙酸銨等緩沖液，若未及時沖洗或環境溫度過低，易在色譜柱內部析出鹽分，堵塞填料孔隙，導致柱壓飆升。?
樣品污染物沉積：樣品前處理不徹底（如未過濾、離心不充分），其中的蛋白質、顆粒物等雜質會附著在色譜柱柱頭，逐漸形成污染層，阻礙流動相流通。?
實操處理措施?
針對鹽分析出：先將柱溫升至 40～50℃（避免高溫損壞色譜柱，需參考柱子耐受范圍），用純水以 0.2～0.5mL/min 的低速正向沖洗 30～60 分鐘，待柱壓明顯下降后，降至常溫繼續用純水洗 1 小時，后切換為純甲醇沖洗 30 分鐘，完成柱子再生。?
針對樣品污染：需反向沖洗（將色譜柱進出口反向連接，避免污染物進一步深入柱內），先用純水以 0.3mL/min 沖洗 40 分鐘，再換純甲醇沖洗 30 分鐘；之后用甲醇 - 異丙醇混合液（體積比 4:6）沖洗 20 分鐘（異丙醇可溶解強疏水性雜質），后依次用甲醇、純水洗各 20 分鐘，恢復正向連接后用甲醇沖洗 30 分鐘，靜置備用。?
二、分析型液相色譜儀流動相有氣泡溢出？解決步驟來了?
流動相含氣泡會導致基線漂移、峰形異常，嚴重時中斷液體流動，影響檢測連續性，多與流動相過濾器維護不當有關。?
原因分析?
流動相過濾器（通常為 0.22μm 或 0.45μm 濾膜）長期浸泡在乙酸銨、磷酸二氫鉀等緩沖液中，若實驗后未及時清洗，緩沖液中的微生物會大量繁殖，形成霉菌團堵塞濾膜孔隙，導致流動相流通時產生負壓，吸入空氣形成氣泡。?
實操處理措施?
拆卸過濾器清洗：將過濾器從流路中拆下，放入 5% 硝酸溶液中（硝酸可殺滅霉菌并溶解雜質），超聲清洗 15～20 分鐘（功率 200～300W，避免濾膜破損）；若污染嚴重，可在 5% 硝酸中浸泡 12～36 小時，期間每隔 8 小時搖晃一次。?
恢復流路脫氣：用純水反復沖洗過濾器至無硝酸殘留（可用 pH 試紙檢測沖洗液，呈中性即可），重新安裝到流路中；開啟儀器 “Purge” 脫氣功能，以 3～5mL/min 的流速沖洗流路 10～15 分鐘，觀察氣泡是否消失；后打開泄壓閥，啟動泵用純水以 1mL/min 沖洗過濾器 1 小時，確保流路通暢。?
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三、分析型液相色譜儀無壓力指示且無液體流動？排查這 2 點?
無壓力、無液體流動屬于緊急故障，會直接導致實驗中斷，需優先排查泵體及密封部件。?
原因分析?
泵密封墊圈磨損：泵體中的密封墊圈（通常為氟橡膠材質）長期接觸有機相（如甲醇、乙腈）和緩沖液，易發生老化、變形或磨損，導致流動相泄漏，無法建立壓力。?
泵體進入大量空氣：換流動相時未排氣、流動相液位過低導致泵吸入空氣，或長期閑置后泵內殘留空氣，空氣在泵腔內形成 “氣鎖”，阻礙液體推動，無法產生壓力。?
實操處理措施?
密封墊圈磨損處理：關閉儀器電源，拆卸泵頭部件（需參考儀器說明書，避免損壞精密零件），取出舊墊圈，用無塵紙蘸甲醇擦拭泵頭接觸面，更換同型號新墊圈（安裝時確保無偏移、無褶皺），重新組裝后啟動泵，用純甲醇以 1mL/min 流速運行 30 分鐘，檢查是否泄漏。?
泵體排氣處理：在泵出口處連接一個 50mL 玻璃注射器（去掉針頭，確保接口密封），開啟泵以 0.5mL/min 流速運行，同時緩慢拉動注射器活塞，將泵腔內的空氣抽出；待注射器內無氣泡后，關閉泵，取下注射器，重啟泵用純甲醇沖洗流路 20 分鐘，觀察壓力是否恢復正常。?
四、分析型液相色譜儀壓力波動大、流量不穩定？這樣解決?
壓力波動大、流量不穩定會導致保留時間漂移、峰面積重復性差，多與系統氣泡或單向閥污染有關。?
原因分析?
系統存在空氣：流動相脫氣不充分（如未使用在線脫氣機、超聲脫氣時間不足）、流路接口松動，或流動相瓶中液位過低，導致空氣持續進入系統，造成壓力忽高忽低。?
單向閥污染卡塞：單向閥內的寶石球與閥座是控制液體單向流動的核心部件，若流動相中的微小顆粒、鹽類雜質卡在兩者之間，會導致單向閥密封不嚴，液體回流，引發壓力波動和流量不穩定。?
實操處理措施?
系統排氣與檢查：確保流動相經超聲脫氣 20～30 分鐘（或開啟在線脫氣機），流動相瓶液位保持在 1/2 以上；檢查流路所有接口（如管路接頭、進樣閥接口），用扳手輕輕擰緊（避免過度用力損壞螺紋）；開啟泵以 2mL/min 流速運行，觀察壓力曲線，若仍波動，進行下一步。?
單向閥清洗：關閉泵電源，拆下單向閥（注意區分進出口方向，做好標記），放入盛有丙酮的燒杯中（丙酮可溶解多數有機雜質和鹽類），超聲清洗 10～15 分鐘；取出后用純甲醇沖洗干凈，晾干后按原方向安裝，重啟泵用純甲醇運行 30 分鐘，觀察壓力是否平穩。?
五、分析型液相色譜儀色譜峰分叉？原因與修復方法?
色譜峰分叉是影響檢測準確性的常見問題，會導致組分定性錯誤、定量偏差，主要與色譜柱狀態相關。?
原因分析?
色譜柱污染嚴重：長期進樣后，樣品中的強吸附性雜質（如色素、大分子有機物）未被及時沖洗，在色譜柱內形成固定污染區，導致部分組分在污染區和正常填料區同時保留，出現峰分叉。?
柱頭填料塌陷：色譜柱長期使用或受到壓力沖擊（如突然升高流速、柱壓過高），柱頭的填料會出現松動、塌陷，形成凹陷區域，流動相流經時產生 “死體積”，導致組分峰分裂。?
實操處理措施?
色譜柱污染修復：若為反相色譜柱（如 C18 柱），先用純甲醇沖洗 30 分鐘，再用甲醇 - 水（10:90）沖洗 40 分鐘，接著用甲醇 - 乙腈（50:50）沖洗 30 分鐘，后用純甲醇沖洗 30 分鐘；若污染嚴重，可加入 0.1% 甲酸水溶液沖洗（增強雜質溶解性），但需注意柱子是否耐受酸性流動相。?
柱頭填料修復：需在超凈環境下操作，先拆下色譜柱柱頭螺母，用無塵棉簽輕輕擦拭柱頭表面，去除松動的污染填料；取少量同型號色譜柱填料（顆粒度一致），用甲醇調成糊狀，緩慢滴加到柱頭凹陷處，邊滴加邊用不銹鋼桿（頂端磨平）輕輕壓實，確保填料與原有填料齊平；補填完成后，用純甲醇沖洗柱頭 10 分鐘，重新安裝柱頭螺母，用純甲醇正向沖洗柱子 1 小時，待峰形恢復后再使用。?
六、分析型液相色譜儀峰面積重復性差？關鍵排查點?
峰面積重復性差會導致定量結果不可靠，影響實驗數據的可信度，多與進樣系統操作或部件損耗有關。?
原因分析?
進樣閥漏液：進樣閥的密封墊圈（如轉子密封墊）長期使用后磨損，或進樣時操作不當（如閥切換過快、用力過猛），導致樣品在進樣過程中泄漏，實際進入色譜柱的樣品量不一致。?
進樣操作不當：進樣針未完全插入進樣閥的定量環接口（即 “未插到位”），導致樣品未全部注入定量環；或樣品量不足（如定量環為 20μL，僅注入 10μL 樣品），且未進行 “過載進樣” 操作，導致實際進樣量波動。?
實操處理措施?
進樣閥維護：關閉儀器，拆卸進樣閥的轉子密封墊，用甲醇清洗進樣閥內部，更換同規格新密封墊（安裝時確保位置正確，避免偏移）；重新組裝后，用微量注射器吸取純甲醇，注入進樣閥，切換閥門至 “INJECT” 位，觀察是否有漏液，若無漏液，進行下一步驗證。?
規范進樣操作：確保進樣針完全插入進樣閥接口（插入時感到輕微阻力即可，避免暴力插入損壞接口）；若使用定量環進樣，樣品量需為定量環體積的 2～3 倍（如 20μL 定量環，注入 40～60μL 樣品），確保定量環充滿；注射樣品后，以平穩速度將閥從 “LOAD” 位切換到 “INJECT” 位（切換時間控制在 1 秒內，避免樣品擴散）；同時，避免使用濃度過高的樣品（建議濃度控制在儀器檢測線性范圍內），防止樣品在定量環內吸附，影響重復性。?
分析型液相色譜儀常見故障匯總表
分析型液相色譜儀的穩定運行依賴日常規范操作與定期維護，上述 6 類常見故障多可通過 “提前預防 + 及時處理” 規避。建議實驗室建立儀器使用臺賬，記錄每次實驗的流動相配置、樣品處理方式、柱壓變化等數據；實驗后及時用合適的溶劑沖洗流路和色譜柱，定期檢查泵密封件、單向閥、進樣閥等易損部件，延長儀器使用壽命，確保檢測數據的準確性與可靠性。若故障無法通過上述方法解決，建議聯系儀器廠商專業售后人員，避免自行拆解精密部件導致二次損壞。
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