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液相色譜儀標準操作指南與常見問題解決方案
作者：依利特 來源：液相售后 2025-10-22 11:20:07
液相色譜儀憑借高效分離、精準分析的優勢，已成為教學科研、制藥生產、環保監測、食品檢測及生物工程等領域的核心設備。正確操作儀器不僅能保障分析結果的可靠性，更能延長設備使用壽命。本文將詳細介紹液相色譜儀的完整操作流程，并針對實際應用中常見的問題提供解決方案，為相關從業者提供實用參考。
一、液相色譜儀標準操作流程
（一）流動相準備
流動相的純度與處理質量直接影響分析結果。需根據實驗方案配制所需流動相，例如常用的甲醇 - 水混合液（如體積比 8:2），同時準備足量純甲醇。所有溶劑均需通過 0.45μm 或 0.22μm 濾膜過濾，去除微小顆粒物；之后進行超聲處理，徹底脫除溶解在溶劑中的氣體，避免后續操作中出現管路堵塞或基線異常。
（二）開機與系統準備
打開泵電源，首先確定并設置好儀器壓力上限，如普通HPLC通常設定為壓力上限為40MPa，，若已完成設定可直接進入下一步。
將泵的過濾頭放入純甲醇中，設置流速為 1ml/min，啟動泵沖洗系統 10-20 分鐘，完成后停止泵運行。
把過濾頭轉移至已配制好的目標流動相中，重新啟動泵，讓流動相在系統內循環。
打開檢測器電源，根據檢測需求設定波長（如檢測有機物常用 280nm），按下 “調零” 鍵完成基線校準，確保檢測數據準確。
（三）工作站啟動與基線監控
啟動色譜工作站后，留意界面是否出現儀器與工作站連接成功的信號。持續觀察基線變化，待基線平穩無明顯波動后，說明系統已達到進樣條件。。
（四）進樣操作
進樣前再次確認基線處于正常顯示范圍，若超出范圍需重新進行調零。
將進樣閥設置在“LOAD”（上樣）位置，用微量進樣針注入標樣或樣品，隨后迅速將進樣閥轉至“INJECT”（進樣）位置，工作站會自動開始采集數據。
待所有色譜峰完全出現在圖譜上后，點擊工作站中的“停止”按鈕，結束本次數據采集。
（五）校正曲線建立（定量分析專用）
設置定量參數：點擊工作站中的 “定量參數” 選項，選擇 “峰面積” 作為定量方式，“外標法” 作為定量方法，標準點數設為 “1 點”，次方設為 “1”，同時明確濃度單位與結果單位。
填寫組份表：進入 “組份表” 界面，輸入待測組份名稱（如檢測食品中的辣椒素）、預期保留時間（如 5.2 分鐘）及標準濃度（如 100μg/mL）。
生成校正曲線：點擊 “校正曲線” 功能，為每個標樣點選擇對應的譜圖文件，點擊 “重校正” 生成曲線，確認曲線線性合格后保存設置，用于后續樣品定量計算。
（六）樣品分析與數據查看
對待測樣品重復進樣操作，待色譜峰全部出完后停止數據采集。點擊工作站中的 “屏幕報告”，即可查看樣品中目標組份的含量等分析結果；若需分析多個樣品，可按相同步驟依次操作。
若需回顧歷史數據，可進入 “再處理” 界面，通過 “打開數據文件” 選擇對應樣品的譜圖，點擊 “重新計算” 后查看 “屏幕報告”，即可獲取歷史分析結果。
（七）關機與系統維護
先關閉檢測器電源，避免后續操作中檢測器受損。
停止泵運行，若實驗中使用了含緩沖鹽（如磷酸鹽、醋酸鹽）的流動相，需先將過濾頭放入高比例水相（如 90% 水）中，啟動泵沖洗系統 30 分鐘以上，徹底清除管路與色譜柱中的鹽分；之后將過濾頭移至純甲醇中，以 1ml/min 流速沖洗 10-20 分鐘，直至系統壓力穩定。
停止泵運行，關閉泵電源，可提前關閉電腦。
后，用純甲醇或純凈水清洗進樣閥，去除殘留樣品，完成整個關機流程。
表 1.液相色譜儀標準操作流程（分階段）
相關產品推薦：1、高效液相色譜儀 2、超高效液相色譜儀 3、制備液相色譜儀 4、專用液相色譜儀
二、液相色譜儀常見問題解答（Q&A）
Q1：為何流動相在使用前必須過濾和超聲？
A1：過濾的核心作用是去除流動相中肉眼不可見的微小顆粒物，防止這些雜質堵塞色譜柱篩板與管路，影響系統正常運行；超聲處理則是為了脫除流動中溶解的氧氣、氮氣等氣體，避免這些氣體在泵內形成氣泡導致壓力波動，或在檢測器中干擾信號，造成基線噪音增大、出現 “鬼峰” 等問題。
Q2：泵啟動后壓力異常偏高，可能是什么原因？
A2：主要有四種常見原因：一是色譜柱或管路因雜質堆積發生堵塞；二是流動相過濾不徹底，殘留顆粒物在系統內累積；三是保護柱或在線過濾器吸附過多雜質，達到飽和狀態；四是泵的流速設置過高，超出系統耐受范圍。排查時可先斷開色譜柱入口端，啟動泵觀察壓力是否下降，以此判斷堵塞位置在柱子還是前段管路。
Q3：泵啟動后壓力異常低或無壓力，該如何處理？
A3：首先需排查三個關鍵問題：一是泵內是否進入大量氣泡，導致無法正常輸送液體；二是管路接口是否松動或損壞，出現漏液情況；三是泵的過濾頭是否被雜質堵塞，或色譜柱未正確連接。處理時可先檢查所有接口密封性，再用純甲醇以較高流速（如 5ml/min）進行排液操作，排除泵內氣泡。
Q4：基線噪音大、不穩定，可能是哪些因素導致的？
A4：常見原因包括五點：一是檢測池或系統內殘留氣泡，可通過提高流速、用異丙醇沖洗檢測池排除；二是流動相混合不均勻，或溶劑純度不足（如含雜質），影響信號穩定性；三是檢測器燈使用時間過長，能量衰減或壽命將至，需更換新燈；四是實驗室溫度波動大，或流動相溫度與室溫差異明顯；五是色譜柱被污染，柱效下降，需進行清洗再生。
Q5：保留時間不穩定（時快時慢），該如何解決？
A5：保留時間漂移多與流動相穩定性和泵的精度相關。解決時需做到三點：一是確保流動相按比例準確配制，且已充分混合均勻，避免因比例偏差導致洗脫能力變化；二是檢查泵的輸液管路是否漏液，漏液會導致實際流速低于設定值，影響保留時間；三是確認色譜柱柱溫箱溫度是否穩定，同時延長流動相平衡時間（如 30-60 分鐘），確保色譜柱達到穩定工作狀態。
Q6：色譜峰出現拖尾或分叉，可能是什么問題？
A6：主要與色譜柱性能和樣品處理相關：一是色譜柱使用時間過長，柱效下降，或被強吸附性雜質污染，需用專用溶劑（如甲醇 - 水 - 乙腈混合液）清洗再生；二是樣品溶劑與流動相極性差異過大（如用純甲醇溶解樣品，流動相為低比例有機相），導致樣品在柱內洗脫不均；三是進樣量過大，超出色譜柱大負載能力；四是色譜柱入口篩板破損或內部填料塌陷，需更換新柱。
Q7：圖譜中出現 “鬼峰”（未知峰），該如何排查？
A7：“鬼峰” 來源主要有四個方向：一是前一次樣品殘留，需用純甲醇反復沖洗進樣針和進樣閥；二是流動相被污染，或樣品瓶、溶劑瓶內壁吸附雜質，需更換新的流動相并清洗容器；三是系統管路或色譜柱內的污染物在特定條件下析出，可通過長時間沖洗系統去除；四是樣品在放置過程中或儀器內發生降解，生成新物質，需優化樣品儲存條件或實驗參數。
Q8：關機時為何要用純甲醇沖洗系統？
A8：核心目的是保護色譜柱與管路。若系統內殘留緩沖鹽，直接接觸純甲醇等有機相時，鹽分會因溶解度驟降而析出，形成固體顆粒堵塞色譜柱篩板與管路，嚴重時會損壞色譜柱；用純甲醇沖洗后，可將系統內的有機相置換為甲醇，既能防止微生物在管路內滋生，又能保持色譜柱填料活性，延長柱子使用壽命。
表 2.常見故障現象與解決方案對照表
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